Pozitif / Negatif Kontrollü Gerçek Zamanlı Monkeypox PCR Test Kiti

Şartname
 

ÜRÜN PERFORMANS ENDEKSİ
1. Hassasiyet: 200 kopya/mL.
2. Özgüllük: Enterovirüs (EV), Kızamık virüsü (MV), Kızamıkçık virüsü (RV), Varicella-zoster virüsü (VZV), Dang virüsü (DenV), İnsan Parvovirüs B19(HPVB19), Epstein-barr virüsü ile çapraz reaksiyon yok (EBv), insan herpes virüsü 6(HHV-6) vb.
3. Hassasiyet: CV ≤ %5.
 
 

PROSEDÜRLER
1. Numune hazırlıkları
Klinik örneklerden DNA ekstraksiyonu, virüs DNA ekstraksiyon kitindeki ilgili gerekliliklere ve prosedürlere göre gerçekleştirilir.çıkarılan
DNA, tespit için doğrudan kullanılabilir.Numune ekstraksiyondan hemen sonra saptanmazsa, tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçınarak bekleme için -70°C'de saklanmalıdır.
2. Reaksiyon sistemi hazırlığı
(1) Sistem hazırlığı: Reaktifi kitten çıkarın ve oda sıcaklığında tamamen çözülmesine izin verin.Karışımı ters çevirin ve hemen santrifüjleyin.N test reaksiyonu (N = test edilecek numune sayısı + pozitif kontrol + negatif kontrol + 1) reaksiyon sistemleri için sırasıyla aşağıdaki gibi hazırlanır.

(2) Reaksiyon sistemi dağılımı: Yukarıdaki reaksiyon tamponunu iyice karıştırın, santrifüjleyin ve 15μL'lik alikuotları floresan PCR cihazı için uygun PCR tüplerine dağıtın.(PCR tüplerini 30 saniye boyunca 6.000 rpm'de santrifüjleyin ve numune tedavi bölgesine nakledin.)
3. Numune yükleme (Numune işleme bölgesi)
Yukarıdaki PCR tüplerine sırasıyla 10μL nükleik asit numunesi, negatif kontrol ve pozitif kontrol ekleyin.Tüpleri sıkıca kapatın ve 6.000 rpm'de 10 saniye santrifüjleyin ve ardından PCR amplifikasyon bölgesine taşıyın.
* Önlem: Aşağıdaki sırayla numune eklemek
önerilen: negatif kontrol-> nükleik asit numunesi -> pozitif kontrol.
 
4. PCR amplifikasyonu (PCR amplifikasyon bölgesi)
4.1 Amplifikasyon için kapaklı PCR tüplerini gerçek zamanlı PCR makinesine koyun.
4.2 Floresan PCR döngüsü koşulu ayarı

Adım 3:60℃'de floresan sinyallerini toplayın;ABI 7500 için 35s, SLAN-96S/96P için 20s, diğer Gerçek Zamanlı PCR Sistemleri için 13s.Toplam hacim: 25μL.
4.3 Tespitten sonra imha etme
Reaksiyondan sonra PCR tüplerini kapalı bir torbaya atın ve kullanılmış tüpleri tıbbi atık olarak değerlendirin.
 
5. Sonuç analizi için ayarlar
Taban çizgisini, tüm numunelerin floresan sinyallerinin nispeten kararlı olduğu (tüm numunelerde önemli dalgalanmaların olmadığı) üstel amplifikasyondan önceki bir bölgeye ayarlayın;başlangıç ​​noktasını (döngü numarası) başlangıçtaki sinyal dalgalanmalarından uzağa ayarlayın
floresan toplama aşaması;üstel amplifikasyona girmek için ilk örneğin Ct'sinden önce bitiş noktasını (döngü numarası) 1~3 döngü ayarlayın.4~15 döngü önerilir.
Negatif kontrol amplifikasyon eğrisinin (düzensiz gürültü eğrisi) en yüksek noktasının hemen üzerinde eşiği ayarlayın.
 
6. Kalite kontrol kriterleri
Numune sonuçlarını değerlendirmeden önce, Pozitif Kontrol ve Negatif Kontrol aşağıdaki yorumlama tablosu kullanılarak yorumlanmalı ve Pozitif Kontrol ve Negatif Kontrol eğrisi doğru bir şekilde gerçekleştirilmelidir, aksi takdirde numune sonucu geçersizdir.

 
7. Test Sonuçlarının Yorumlanması
Monkeypox Virus için FAM kanalları, tespit sonucu aşağıdaki gibi yorumlanmalıdır.
a) Pozitif: Ct ≤ 38 ve amplifikasyon eğrisi S şeklindedir.
b) Şüpheli: 38 < Ct ≤ 40 ve amplifikasyon eğrisi S şeklinde, ikinci bir test gerekiyor.İkinci test için Ct ≤ 40 ve amplifikasyon eğrisi S-şekilli ise pozitif kabul edin.İkinci test için VIC kanalında Ct > 40 veya boş Ct ve Ct ≤ 35 ise negatif kabul edilir.
c) Negatif: VIC kanalında Ct > 40 veya null Ct ve Ct ≤ 35.
d) Yeniden test: VIC kanalında Ct > 40 veya null Ct ve Ct > 35.